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通用型細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)

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· 資料簡介: 通用型細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)

 

主要用途

 

通用型細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑是一種旨在X-Gal為底物,通過組織/細(xì)胞內(nèi)β-半乳糖苷酶在酸性條件下穩(wěn)定表達(dá),催化生成深藍(lán)色的沉積產(chǎn)物,從而在光學(xué)顯微鏡下觀察到藍(lán)色表達(dá)的細(xì)胞作為細(xì)胞復(fù)制性衰老replicative senescence)的分子特征來識別和探測衰老細(xì)胞的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究。其適用于各種人體和動物細(xì)胞、活體組織以及冰凍組織切片檢測。產(chǎn)品即到即用,性能穩(wěn)定,參數(shù)優(yōu)化,著色敏感。

  

技術(shù)背景

 

細(xì)胞復(fù)制性衰老是細(xì)胞控制其生長潛能的保障機制。衰老細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1期,表現(xiàn)出細(xì)胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征,尤其在酸性條件下,細(xì)胞內(nèi)β-半乳糖苷酶活性增加,而成為細(xì)胞衰老的生物學(xué)標(biāo)記。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

清理液(Reagent A)  毫升

固定液(Reagent B 毫升

酸性液(Reagent C 毫升

稀釋液(Reagent D 毫升

染色液(Reagent E 毫升

產(chǎn)品說明書       x1

 

保存方式

 

保存染色液(Reagent E)在-20℃冰箱里其余的保存在4℃冰箱里;稀釋液(Reagent D)和染色液(Reagent E)用鋁箔封裹,避免光照;有效保證6

 

用戶自備

 

2毫升離心管:用于配制染色工作液

15毫升錐形離心管:用于配制染色工作液

恒溫培養(yǎng)箱:用于染色孵育

切片儀:用于石蠟或冰凍切片

光學(xué)顯微鏡:用于觀察染色后的細(xì)胞

 

 

 

 

 

實驗步驟

 

一、 細(xì)胞染色

 

操作一、25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶染色

 

實驗開始前,將試劑盒里的染色液(Reagent E從-20的冰箱里取出,放進冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀釋液(Reagent D2毫升離心管,加入xx微升染色液(Reagent E,混勻后,放進37℃恒溫水槽里預(yù)熱,標(biāo)記為染色工作液。然后進行下列操作:

 

1. 小心抽去25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液

2. 小心加入xx毫升清理液(Reagent A,清洗生長中的細(xì)胞表面

3. 小心抽去清理液

4. 小心加入xx毫升固定液(Reagent B,覆蓋整個生長表面

5. 在室溫下孵育5分鐘

6. 小心抽去固定液

7. 小心加入xx毫升酸性液(Reagent C,清洗細(xì)胞表面

8. 小心抽去酸性液

9. 重復(fù)實驗步驟78兩次

10. 小心加入xx毫升預(yù)熱的染色工作液,覆蓋整個細(xì)胞表面

11. 放進37培養(yǎng)箱,孵育3小時至16小時,或細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色(注意:避免液體蒸發(fā)

12. 在光學(xué)顯微鏡下觀察和計數(shù):表達(dá)衰老特異性β- 半乳糖苷酶的細(xì)胞為陽性細(xì)胞,呈現(xiàn)藍(lán)色

 

操作二、24孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色

 

實驗開始前,將試劑盒里的染色液(Reagent E從-20的冰箱里取出,放進冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀釋液(Reagent D15毫升錐形離心管,加入xx微升染色液(Reagent E,混勻后,放進37℃恒溫水槽里預(yù)熱,標(biāo)記為染色工作液。然后進行下列操作:

 

1.小心抽去24孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液

2.每孔加入xx微升清理液(Reagent A,清洗生長中的細(xì)胞表面

3.小心抽去每孔里的清理液

4.每孔加入xx微升固定液(Reagent B,覆蓋整個生長表面

5.在室溫下孵育5分鐘

6.小心抽去固定液

7.每孔加入xx微升酸性液(Reagent C,清洗細(xì)胞表面

8.小心抽去酸性液

9.重復(fù)實驗步驟78一次

10.每孔加入xx微升預(yù)熱的染色工作液,覆蓋整個細(xì)胞表面

11.放進37培養(yǎng)箱,孵育3小時至16小時,或細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色(注意:避免液體蒸發(fā)

12.在光學(xué)顯微鏡下觀察和計數(shù):表達(dá)衰老特異性β- 半乳糖苷酶的細(xì)胞為陽性細(xì)胞,呈現(xiàn)藍(lán)色

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