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冰凍切片組織衰老特異性β-半乳糖苷酶檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(中文版)

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· 上 傳 者: 上海極威生物科技有限公司

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· 所屬分類:應(yīng)用方法

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主要用途

冰凍切片組織衰老特異性β-半乳糖苷酶檢測(cè)試劑是一種旨在以X-Gal為底物,通過(guò)切片組織內(nèi)β-半乳糖苷酶在酸性條件下穩(wěn)定表達(dá),催化生成深藍(lán)色的沉積產(chǎn)物,從而在光學(xué)顯微鏡下觀察到藍(lán)色表達(dá)的組織細(xì)胞作為組織復(fù)制性衰老(replicative senescence)的分子特征來(lái)識(shí)別和探測(cè)衰老組織細(xì)胞的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究。其適用于各種人體和動(dòng)物的冰凍組織切片。產(chǎn)品即到即用,性能穩(wěn)定,參數(shù)優(yōu)化,著色敏感。  

技術(shù)背景

細(xì)胞復(fù)制性衰老是細(xì)胞控制其生長(zhǎng)潛能的保障機(jī)制。衰老細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1期,表現(xiàn)出細(xì)胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征,尤其在酸性條件下,細(xì)胞內(nèi)源性β-半乳糖苷酶活性增加,而成為細(xì)胞衰老的生物學(xué)標(biāo)記。 

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液(Reagent A)    毫升

固定液(Reagent B)  毫升

酸性液(Reagent C)  毫升

稀釋液(Reagent D)  毫升

染色液(Reagent E)  毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書         1份 

保存方式

保存染色液(Reagent E)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;稀釋液(Reagent D)和染色液(Reagent E)用鋁箔封裹,避免光照;有效保證6月 

用戶自備

15毫升錐形離心管:用于配制染色工作液

恒溫培養(yǎng)箱:用于染色孵育

光學(xué)顯微鏡:用于觀察染色后的組織細(xì)胞

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

實(shí)驗(yàn)開始前,將試劑盒里的染色液(Reagent E)從-20℃的冰箱里取出,置入冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀釋液(Reagent D)到15毫升錐形離心管,加入xx微升染色液(Reagent E),混勻后,置入37℃恒溫水槽里預(yù)熱,標(biāo)記為染色工作液。然后進(jìn)行下列操作:

 

1. 準(zhǔn)備10片待測(cè)的厚為5至10微米的冰凍切片

2. 置于室溫下,小心加上xx微升預(yù)冷的清理液(Reagent A),鋪滿整個(gè)切片表面

3. 小心移去切片上的清理液(Reagent A)

4. 小心加上xx微升預(yù)冷的固著液(Reagent B),鋪滿整個(gè)樣品表面

5. 室溫下孵育10分鐘

6. 小心移去切片上的固著液(Reagent B)

7. 小心加上xx微升酸性液(Reagent C),鋪滿整個(gè)切片表面

8. 室溫下孵育5分鐘

9. 小心移去切片上的酸性液(Reagent C)

10. 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7至9二次

11. 小心加上xx微升預(yù)熱的染色工作液,鋪滿整個(gè)切片表面

12. 在37℃濕潤(rùn)培養(yǎng)箱里,孵育3至24小時(shí),或組織細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色(注意:避免液體蒸發(fā)

13. 小心移去切片上的染色工作液

14. 小心加上xx微升清理液(Reagent A),鋪滿整個(gè)切片表面

15. 小心移去切片上的清理液(Reagent A)

16. 放上蓋玻片或封片

17. 即刻在光學(xué)顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù):表達(dá)衰老特異性β- 半乳糖苷酶活性的地方,呈現(xiàn)藍(lán)色。

 

注意事項(xiàng)

 

1. 本產(chǎn)品為50次操作

2. 操作時(shí),須戴手套

3. 本產(chǎn)品的參數(shù):固著劑種類和濃度、pH、生色底物的選擇和濃度等達(dá)到*優(yōu)化

4. 使用時(shí),避免污染母液,否則出現(xiàn)絮狀沉淀,影響實(shí)驗(yàn)效果

5. 染色工作液避免光照

6. 切片染色時(shí),須避免光照

7. 染色后的樣品可以在4℃冰箱里長(zhǎng)期保存,同樣須避免光照

8. 組織細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性強(qiáng),孵育3小時(shí)即顯示陽(yáng)性;組織細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性弱,則需要孵育24小時(shí)

9. 組織細(xì)胞染色*長(zhǎng)孵育時(shí)間為24小時(shí)

10. 本產(chǎn)品染色敏感,甚至對(duì)于微弱表達(dá)的酶活性仍然顯色清晰;用戶可以根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整孵育時(shí)間和染色工作液濃度,使染色恰到好處

11. 孵育時(shí)避免液體蒸發(fā)

12. 組織細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色的部位為衰老組織細(xì)胞特異性β-半乳糖苷酶活性的地方

13. 本公司提供系列細(xì)胞衰老檢測(cè)試劑產(chǎn)品

上海極威生物科技有限公司(Shanghai JIwei Biological Technology Co., Ltd.)成立于上海,主營(yíng)產(chǎn)品elisa試劑盒,大鼠elisa試劑盒,小鼠elisa試劑盒,動(dòng)物血清細(xì)胞株,標(biāo)準(zhǔn)品,生化試劑盒等。

 

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)酶聯(lián)免疫ELISA檢測(cè)、生化測(cè)試、液相氣相檢測(cè)、Icp-MS測(cè)試、載體構(gòu)建、RACE、全基因合成、線粒體測(cè)序、熒光定量PCR、基因克隆、定點(diǎn)突變、染色體步移、基因組全序列獲取、環(huán)境微生物多樣性、微生物基因組測(cè)序、微生物菌種鑒定、甲基化分析服務(wù)極威生物秉承以產(chǎn)品質(zhì)量為根本,以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向,以為客戶創(chuàng)造價(jià)值為己任的精神,致力于發(fā)展中國(guó)的科研事業(yè)。

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