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點擊次數(shù)：1188 發(fā)布時間：2016/4/12 15:25:24
ELISA實驗中，不同的檢測標(biāo)本的制備與貯存方法也不同，接下來，我們總結(jié)下常見的集中標(biāo)本的制備與貯存方法，供大家參考：
檢測可溶性蛋白：根據(jù)產(chǎn)品說明書制備血清、血漿標(biāo)本，由于有些樣品對溫度敏感極易喪失活性，應(yīng)盡快分離并分裝（一般300～500ul/管），大多數(shù)標(biāo)本收集和實驗在同一天應(yīng)貯存在2～8℃。若無法立即測定，應(yīng)貯存在-70℃，標(biāo)本貯存時間一般不宜過長，避免反復(fù)凍融。使用前將標(biāo)本平衡至室溫，融化標(biāo)本嚴(yán)禁使用水浴鍋。凍存后或冷藏時間過長的標(biāo)本可能會出現(xiàn)沉淀或小凝集塊，應(yīng)在實驗前離心或過濾（0.45um濾膜）標(biāo)本，體積少的標(biāo)本不建議過濾。所有標(biāo)本的收集要使用無菌管，在無菌/半無菌條件下操作防止污染。
血清：將血液在室溫凝集10～15分鐘，1500g離心20～30分鐘，小心吸取血清。
血漿：按試劑盒中的說明書選擇抗凝劑。收集血液時，輕輕搖動試管使抗凝劑與血液充分混合。將血液在室溫保存 10～15分鐘，1500g離心15～20分鐘，小心吸上層血漿。
尿液：將尿液收集在無菌的容器內(nèi)。1500g離心10～15分鐘或過濾（0.45um濾膜）去除雜質(zhì)。注意：對于尿液標(biāo)本實驗的回歸系數(shù)可能發(fā)生變化。
細(xì)胞培養(yǎng)上清液：1500g離心10～15分鐘去除細(xì)胞和細(xì)胞殘渣。若使用常規(guī)典型的培養(yǎng)基，應(yīng)制備兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線，一條使用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液/或?qū)嶒灳彌_液配制標(biāo)準(zhǔn)品，另一條以細(xì)胞培養(yǎng)基配制標(biāo)準(zhǔn)品。若兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線的變化范圍在10%內(nèi)，實驗結(jié)果可用任一曲線分析。
檢測細(xì)胞相關(guān)和細(xì)胞內(nèi)蛋白：細(xì)胞相關(guān)蛋白和其它細(xì)胞內(nèi)蛋白在ELISA實驗前需要對標(biāo)本進(jìn)行處理將目的蛋白釋放出來。
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王小姐
