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技術(shù)文章

細(xì)胞P38激酶總活性光度法定量檢測(cè)試劑盒測(cè)定準(zhǔn)備

點(diǎn)擊次數(shù):17026   發(fā)布時(shí)間:2021/6/24 18:09:48

 一、細(xì)胞P38激酶總活性光度法定量檢測(cè)試劑盒測(cè)定準(zhǔn)備

1.準(zhǔn)備好待測(cè)樣品(例如細(xì)胞裂解懸液等),置于冰槽里 

2.設(shè)定好分光光度儀(溫度為30℃):波長(zhǎng)為340nm,間隔1分鐘,讀數(shù)6次(共5分鐘),并置零

3.緩沖液(Reagent C室溫下均衡溫度

 

二、背景對(duì)照測(cè)定

1.移取xx微升緩沖液(Reagent C到新的比色皿

2.加入xx微升酶促液(Reagent D

3.加入xx微升反應(yīng)液(Reagent E

4.加入xx微升底物液(Reagent F

5.放進(jìn)30培養(yǎng)箱里靜置3分鐘

6.加入xx微升陰性液(Reagent G

7.上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))

8.即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為背景空對(duì)照:340波長(zhǎng)讀數(shù)0分鐘 340波長(zhǎng)讀數(shù)5分鐘 

 

三、樣品總活性測(cè)定

1.移取xx微升緩沖液(Reagent C到新的比色皿

2.加入xx微升酶促液(Reagent D

3.加入xx微升反應(yīng)液(Reagent E

4.加入xx微升底物液(Reagent F

5.放進(jìn)30培養(yǎng)箱里靜置3分鐘

6.加入10微升待測(cè)樣品(注意:100微克細(xì)胞裂解蛋白;樣品須溶解

7.上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))

8.即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為樣品總活性讀數(shù):340波長(zhǎng)讀數(shù)0分鐘 340波長(zhǎng)讀數(shù)5分鐘 

 

 

 

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