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技術(shù)文章

維生素B6試劑盒@熱點(diǎn)新聞

點(diǎn)擊次數(shù):17184   發(fā)布時(shí)間:2021/5/26 21:50:21

維生素B6試劑盒@熱點(diǎn)新聞簡(jiǎn)介

維生素B6試劑盒簡(jiǎn)單易用,采用微生物方法,在微孔板種定量檢測(cè)食品、藥品和飼料中的維生素B6總量(包括添加和原生維生素B6)。所有所需的試劑均包含在試劑盒中。本試劑盒共能提供96次檢測(cè)(包括標(biāo)準(zhǔn)品)。使用ELISA reader (610 - 630 nm 或者540 - 550 nm)進(jìn)行讀數(shù)。

樣品處理:

液體樣品:無菌過濾、稀釋

固體樣品:均質(zhì)樣品、提。x心)、無菌過濾和稀釋

含原生維生素B6的樣品處理:

固體樣品:均質(zhì)樣品、酸處理、提取(離心)、無菌過濾和稀釋

所需時(shí)間:試驗(yàn)過程…….. …………………………………60分鐘

評(píng)價(jià)時(shí)間…………………………………………….2分鐘

孵育:30 °C黑暗條件下44 – 48小時(shí)

標(biāo)準(zhǔn)品范圍:0.040.24 mg / 100gml

回收率: 90105

Intra-assay CV for standards: < 10 %

Inter-assay CV for standards: < 10 %

1.產(chǎn)品用途

維生素B6微孔板檢測(cè)試劑盒是利用微生物方法,用于定量檢測(cè)食品、藥品和飼料中的維生素B6總量(包括添加和原生維生素B6)。本微生物檢測(cè)系統(tǒng)符合標(biāo)準(zhǔn)。

2. 檢測(cè)原理

維生素B6是從樣品稀釋提取所獲得的。將稀釋了的提取物和維生素B6檢測(cè)培養(yǎng)基加入包被有釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae  ATCC Nr. 9080)的微孔中。則釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的生長(zhǎng)狀況取決于維生素B6的含量。添加維生素B6作為標(biāo)準(zhǔn)或者作為樣品混合物,細(xì)菌會(huì)一直生長(zhǎng)直至維生素B6被消耗殆盡。孵育條件應(yīng)為37 °C黑暗條件下孵育44-48小時(shí)。細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)新陳代謝的強(qiáng)度和維生素B6的含量形成關(guān)系并可以繪制稱標(biāo)準(zhǔn)曲線,通過ELISA reader610 - 630 nm (或者540 - 550 nm)讀取結(jié)果。

3.檢測(cè)說明

水質(zhì)在整個(gè)測(cè)試過程中起著十分重要的作用。本試劑盒中帶有作為溶劑的無菌蒸餾水,用于重組、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的提取。附加的蒸餾水在以上過程中都是必不可少的。

要求整個(gè)檢測(cè)過程中保持無菌操作。所使用的玻璃器皿保zheng無化學(xué)殘留物、清潔劑、化學(xué)物質(zhì)和微生物污染。因此,玻璃器皿使用先用3 mol / l的鹽酸漂洗,然后再用蒸餾水250 °C (482 °F)條件下加熱1小時(shí)。在使用回至室溫。

維生素B6試劑盒@熱點(diǎn)新聞樣品制備和提取
可以不用在無菌條件下進(jìn)行。樣品的過濾、稀釋與檢測(cè)的準(zhǔn)備工作則與整個(gè)檢測(cè)過程一樣必須在無菌條件下進(jìn)行。

檢測(cè)的每一個(gè)步驟都需要校正。標(biāo)準(zhǔn)品和樣品應(yīng)該進(jìn)行3次檢測(cè)(注意:標(biāo)準(zhǔn)中推薦3次檢測(cè)方法)。未知樣品應(yīng)該用2份提取物的稀釋液檢測(cè)(誤差應(yīng)該小于10%)。如果在進(jìn)一步稀釋時(shí)檢出的維生素B6含量提高,則可能含有抑制劑,比如重金屬或者抗生素。

4. 提供試劑

每個(gè)試劑盒中包含足夠進(jìn)行96次試驗(yàn)的材料和標(biāo)準(zhǔn)品

每個(gè)試劑盒中包含:

1 ×  96孔微孔板,包被有釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae  ATCC Nr. 9080)

3 × 無菌蒸餾水 (30 ml) ,用于準(zhǔn)備培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品提取稀釋液

3 × 維生素B6培養(yǎng)基 (固體)

3 × 維生素B6氫氯化物標(biāo)準(zhǔn)品 (固體)

3 × 粘性箔

1 × 微孔板固定器

5. 需要試劑但試劑盒種不提供

黑暗條件下的培養(yǎng)箱,30 °C

−90 -100 °C (194 - 212 °F)水浴,或者高壓滅菌鍋

−ELISA reader 610 - 630 nm (540 - 550 nm)

−pH 測(cè)量?jī)x

離心機(jī),大約10000 × g

刻度移液槍 20 - 200 µl; 100 - 1000 µl

滅菌微量移液槍 tips 20 - 200 µl and 100 - 1000 µl

無菌試管 1.5 - 2.0 ml

移液槍 5 or 10 ml

帶帽的無菌離心機(jī)管 (15 and 50 ml)

帶無菌注射器的0.2 µm無菌濾膜

雙蒸水用于樣品提取(available at ifp)

−0.1mol / l HCl

−2 mol / l NaOH (0.8 g 溶解于100 ml水中)

維生素B6試劑盒@熱點(diǎn)新聞檢測(cè)原生維生素B6所需試劑

- 1 mol / l 硫酸

- 氫氧化鈉溶液(100ml溶液中含40g

6用戶須知

檢測(cè)培養(yǎng)基有可能刺激眼睛、皮膚和隔膜

完成試驗(yàn)后須根據(jù)規(guī)章處理檢測(cè)儀器(如使用高壓滅菌鍋)

7.貯藏條件

試劑盒應(yīng)存放在28℃條件下

處理過的試劑(標(biāo)準(zhǔn)品、培養(yǎng)基)和維生素B6緩沖液應(yīng)馬上使用,并在檢測(cè)后丟棄。

將未使用的微孔板條放回原來的箔袋中,并與干燥劑一起重新封好,放在28℃溫度下。微孔板須防止受潮或受到其他污染。

請(qǐng)勿在試劑盒標(biāo)注的保質(zhì)期之后使用。

8.試劑失效的跡象

空白的吸光度值大于標(biāo)準(zhǔn)品1。

濃度標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值小于0.6630nm)。

9.樣品處理

樣品應(yīng)儲(chǔ)存在4℃、避光條件下。

檢測(cè)富集營(yíng)養(yǎng)樣品中的游離維生素B6時(shí),熱水提取方法通常就足夠了。但是富集營(yíng)養(yǎng)的飲料可以在過濾之后直接使用。由于使用熱水提取,所以原生維生素B6只能被部分檢測(cè)。對(duì)于檢測(cè)原生維生素B6總量,樣品應(yīng)用酸水解處理。

樣品提取時(shí)需要1g1ml樣品溶解于40ml雙蒸水或提取溶液中。相當(dāng)于樣品的稀釋倍數(shù)為40,這個(gè)稀釋倍數(shù)已經(jīng)包括在標(biāo)準(zhǔn)曲線中。

樣品提取后需要進(jìn)一步稀釋。稀釋倍數(shù)取決于由標(biāo)準(zhǔn)曲線中間部分顯示的標(biāo)準(zhǔn)濃度,它是除以其含量獲得(詳見產(chǎn)品標(biāo)簽或認(rèn)證,每100g100ml濃度)。至于涉及到膠囊或藥片時(shí),濃度時(shí)常表達(dá)為“/片膠囊,此時(shí)濃度必須轉(zhuǎn)化成“/100g”(詳見11.的計(jì)算示例)。這個(gè)稀釋倍數(shù)在計(jì)算結(jié)果的時(shí)候必須考慮。

樣品提取時(shí)使用無菌濾膜(0.2μm)進(jìn)行過濾,此時(shí)。如果由于固體顆粒或者渾濁導(dǎo)致過濾不順利,則在無菌過濾之應(yīng)先離心(至少在8000g的離心力下離心5分鐘)。

樣品提取液可以在提取當(dāng)天使用,使用之應(yīng)避光保存。提取稀釋液應(yīng)馬上使用。

9.1.液體樣品(富含維生素的果汁、健康飲品)

加入1ml樣品至50ml無菌離心管中,準(zhǔn)que加入雙蒸水至40ml,搖勻。使用無菌0.2μm濾膜過濾1.01.5ml樣品到一個(gè)無菌試管中。是否進(jìn)一步稀釋則取決于濃度范圍(詳見計(jì)算示例中的稀釋倍數(shù))。

9.2.含維生素的可溶固體樣品(粉末、藥片)

稱取1g樣品至50ml無菌試管,加入30ml 0.1mol / l的鹽酸,振蕩至充分溶解,再用2mol / l 氫氧化鈉調(diào)整pH值至4.55.5。用雙蒸水準(zhǔn)que加至40ml刻度。用0.2μm無菌濾膜過濾1.01.5ml樣品至一無菌試管中。是否進(jìn)一步稀釋則取決于濃度范圍(詳見計(jì)算示例中的稀釋倍數(shù))。

9.3.維生素膠囊、藥片

先膠囊或藥片的重量必須確定(平均510個(gè)膠囊或藥片)。藥片用研缽或攪拌機(jī)均質(zhì),膠囊須切開并取出其中的顆粒進(jìn)行試驗(yàn)。

稱取1g藥片或切開1個(gè)膠囊至一個(gè)50ml無菌離心管中,用0.1mol / lHCl加至30ml,搖勻。在90100℃水浴中提取30分鐘。在提取時(shí)試管須振蕩至少5次。當(dāng)然期間必須bao試管是否充分封閉。迅速降溫至30℃以下。用2mol / l NaOH調(diào)整pH值至4.55.5。加無菌水精que40ml。使用0.2μm無菌濾膜過濾1.01.5ml樣品至一個(gè)無菌試管中。是否進(jìn)一步稀釋則取決于濃度范圍(詳見計(jì)算示例中的稀釋倍數(shù))。

9.4 含維生素的谷物、嬰兒食品、面包、面粉、食品添加劑

均質(zhì)樣品,稱量1g樣品至一50ml離心管中,用0.1mol / lHCl加至30ml,搖勻。在90100℃水浴中提取30分鐘。在提取時(shí)試管須振蕩至少5次。迅速降溫至30℃以下。用2mol / l NaOH調(diào)整pH值至4.55.5。加無菌水精que40ml。使用0.2μm無菌濾膜過濾1.01.5ml樣品至一個(gè)無菌試管中。是否進(jìn)一步稀釋則取決于濃度范圍(詳見計(jì)算示例中的稀釋倍數(shù))。

9.5 原生維生素B6

提取復(fù)合物時(shí),檢測(cè)含原生維生素B6的樣品必須先經(jīng)過用酸水化處理。稱量1g樣品至一50ml離心管中,用1.0mol / l的硫酸加至30ml,搖勻。在90100℃水浴中提取6小時(shí)。在提取時(shí)試管須振蕩至少5次。迅速降溫至30℃以下。用2mol / l NaOH調(diào)整pH值至4.55.5。加無菌水精que40ml。使用0.2μm無菌濾膜過濾1.01.5ml樣品至一個(gè)無菌試管中。是否進(jìn)一步稀釋則取決于濃度范圍(詳見計(jì)算示例中的稀釋倍數(shù))。

10 檢測(cè)過程

10.1 準(zhǔn)備

裝有無菌水的瓶子:推開藍(lán)色帽,沿著玻璃邊緣垂直向上拉開,丟棄。

維生素B6培養(yǎng)基:足夠進(jìn)行至少6條微孔板試驗(yàn),培養(yǎng)基必須在試驗(yàn)之新鮮制備。打開瓶蓋用鑷子從干燥劑中取出培養(yǎng)基,丟掉干燥劑。

-加入10ml無菌水(取自試劑盒中)至維生素B6培養(yǎng)基中

-蓋好培養(yǎng)基瓶,搖勻

-在90100℃水浴中加熱至少5分鐘,期間振蕩至少5次;期間bao瓶子封閉

-迅速冷卻至室溫(低于30℃

-使用0.2μm無菌濾膜過濾培養(yǎng)基至15ml無菌離心管中

每個(gè)維生素B6氫氯化物標(biāo)準(zhǔn)品都足夠進(jìn)行至少3個(gè)孔的試驗(yàn)。標(biāo)準(zhǔn)品必須在試驗(yàn)之新鮮制備。

-打開維生素維生素B6氫氯化物標(biāo)準(zhǔn)品瓶,取出蓋子。丟掉蓋子和紅色塞子

-加入x mlx=詳見質(zhì)量bao書)無菌水(取自試劑盒)至標(biāo)準(zhǔn)品瓶中。用移液管溶解標(biāo)準(zhǔn)品:用標(biāo)準(zhǔn)品瓶中的水沖洗移液管尖數(shù)次=標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液

-取6個(gè)無菌管(1.52.0ml)并按照下列表格準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線

mg/100g(ml)

無菌水

μl

 

標(biāo)準(zhǔn)濃縮液

μl

 

總體積

μl

空白:0

900

0

900

標(biāo)準(zhǔn)品10.002

900

100

1000

標(biāo)準(zhǔn)品20.004

400

100

500

標(biāo)準(zhǔn)品30.006

350

150

500

標(biāo)準(zhǔn)品40.008

300

200

500

標(biāo)準(zhǔn)品50.012

200

300

500

10.2.檢測(cè)過程

-用移液管吸取150μl維生素B6培養(yǎng)基至微孔中

-用移液管吸取150μl標(biāo)準(zhǔn)品貨樣品至指定的微孔中(用標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液沖洗移液管尖)

-用粘合箔蓋住微孔條或微孔:除去粘合箔上的保護(hù)層,將其平放在微孔條上,用手或壓舌板將粘合箔平壓,使其充分封閉微孔板條。

注意:bao粘合箔和微孔的封閉性,特別注意微孔的邊緣部分

-在30℃黑暗條件下(可用孵育器)孵育4448小時(shí)

10.3.測(cè)量

-再次向下擠壓粘合箔,將微孔板向上放置在桌面上,在桌面平面上振蕩,使微生物溶解在培養(yǎng)基中

-對(duì)角揭去粘合箔,從左邊開始進(jìn)行

-破壞微孔液體表面所有的泡沫(可以用移液管尖去除)

-用ELISA reader 610630nm(或540550nm)條件下讀取渾濁度

注意:

-當(dāng)孵育4448小時(shí)后,微孔板能在冰箱里多儲(chǔ)存48小時(shí),因此必須在這個(gè)時(shí)間段內(nèi)測(cè)量混濁度

-為了避免由于假期或zhou所產(chǎn)生的時(shí)間上的損失,微孔板能在60小時(shí)之后進(jìn)行評(píng)估計(jì)算。推薦使用定時(shí)器在48小時(shí)之后關(guān)閉孵育器。

11.計(jì)算

推薦在計(jì)算結(jié)果時(shí)使用必發(fā)公司提供的配套軟件。

樣品稀釋倍數(shù)40已經(jīng)包括在標(biāo)準(zhǔn)曲線中。在下面的公式中,需要考慮提取的進(jìn)一步稀釋倍數(shù)和不同的樣品重量。

由于校準(zhǔn)過程中使用了維生素B6氫氯化合物,所以計(jì)算活性維生素B6還必須考慮0.822這個(gè)倍數(shù)。

液體樣品(富含維生素的果汁、健康飲品)

                  從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取的濃度×稀釋倍數(shù)×0.822

維生素B6     ──────────────────────

mg/100ml                   樣品總量(ml

固體樣品(谷物、嬰兒食品、面粉、面包、添加物)

                     從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取的濃度×稀釋倍數(shù)×0.822

維生素B6 ────────────────────────

mg/100g                    樣品總量(g

膠囊或藥片

                  從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取的濃度×稀釋倍數(shù)×0.822

維生素B6     ──────────────────────

mg/100g                     樣品總量(g

從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取的濃度×藥片重量(g×稀釋倍數(shù)×0.822

維生素B6 ──────────────────────────

mg/藥片)                       100×樣品總量(g

樣品提取的稀釋倍數(shù)計(jì)算示例

提取液稀釋應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線中間區(qū)域。因此,濃度應(yīng)轉(zhuǎn)換為維生素B6鈣,并除以標(biāo)準(zhǔn)2

a 固體樣品,標(biāo)注濃度3mg / 100g

計(jì)算:    3mg×1.22 ÷ 0.004mg 915

          → 結(jié)果為稀釋倍數(shù)大約為1000

→ 1 1000 稀釋

1 1000

1 100.1 ml 0.9 ml),1 100.1 ml 0.9 ml),

1 100.1 ml 0.9 ml)。

b 藥片,標(biāo)注濃度3mg / 

計(jì)算:     3mg×1.09 / 片,平均重量1g

         300mg / 100g

300mg×1.22÷0.004mg 91500

結(jié)果為稀釋倍數(shù)大約為90000

→1 90000稀釋

1 90000

1 100.1 ml 0.9 ml),1 100.1 ml 0.9 ml

1 100.1 ml 0.9 ml),1 100.1 ml 0.9 ml

1 90.1 ml 0.8 ml

原創(chuàng)作者:上海極威生物科技有限公司

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