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技術(shù)文章

人白細(xì)胞介素 6(IL-6)ELISA 檢測試劑盒使用說明書

點擊次數(shù):17106   發(fā)布時間:2021/5/24 11:48:23

  本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷

人白細(xì)胞介素 6(IL-6)ELISA 檢測試劑盒使用說明書

檢測原理

試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先 包被人白細(xì)胞介素6(IL-6)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、 標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯 色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成 終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人白細(xì)胞介素6(IL-6)呈正相 關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3.細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5.保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1.酶標(biāo)儀(450nm)

2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

操作注意事項

1.試劑盒保存在 2-8℃,使用室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。

2.實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

3.預(yù)處理后的樣本無需稀釋,直接取 10μL 加樣即可。

4.嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.所有液體組分使用充分搖勻。

試劑盒組成

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

12孔×8條

12孔×4條

標(biāo)準(zhǔn)品

0.3mL

0.3mL

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進(jìn)行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

注:標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:48、24、12、6、3、0pg/mL.

試劑的準(zhǔn)備

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按 1:20 稀釋,即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。

洗板方法

1.手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板 5 次。

2.自動洗板機:每孔注入洗液 350μL,浸泡 1min,洗板 5 次。

操作步驟

1.從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL;

3.待測樣本孔先加待測樣本 10μL,再加樣本稀釋液 40μL;

4.隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體 100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置 1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板 5 次(也可用洗板機洗板)。

6.每孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。

7.每孔加入終止液 50μL,15min 內(nèi),在 450nm 波長處測定各孔的OD 值。

結(jié)果判斷

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在 Excel 工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對應(yīng)OD 值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

試劑盒性能

1.準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值,大于等于0.9900。

2.靈敏度:低檢測濃度小于 0.1 pg/mL。

3.特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于 10%、板間變異系數(shù)小于 15%。

5.貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

6.有效期:6 個月

免責(zé)聲明

1.試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔(dān),本公司概不負(fù)責(zé)。

2.嚴(yán)格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔(dān)。

 

原創(chuàng)作者:上海極威生物科技有限公司

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