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技術(shù)文章

豬口蹄疫病毒O型IgG抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法) 使用說明書

點(diǎn)擊次數(shù):18036   發(fā)布時間:2016/6/22 16:35:51

 豬口蹄疫病毒OIgG抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

 

使用說明書

供應(yīng)商:上海極威生物科技有限公司

【產(chǎn)品名稱】

通用名:豬口蹄疫病毒OIgG抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

英文名:Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine foot and mouth disease virus (ELISA)

【包裝規(guī)格】 96T/盒

【預(yù)期用途】

    口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)感染引起的偶蹄動物共患的急性、熱性、接觸性傳染病。在豬的預(yù)防免疫工作中,*值得關(guān)注的就是強(qiáng)化免疫的接種時機(jī)問題。在過高的抗體水平進(jìn)行免疫,過高的抗體水平還會中和疫苗,影響疫苗的免疫效果,導(dǎo)致免疫失敗;在較低的抗體水平進(jìn)行免疫,又會出現(xiàn)抗體保護(hù)真空期,威脅豬的健康。

    本試劑盒檢測反映抗體水平,利于指導(dǎo)免疫時機(jī)。用于檢測豬血清中口蹄疫O型病毒的抗體,不能用于區(qū)分口蹄疫野毒感染豬和用疫苗免疫豬。

【原    理】

本試劑盒系由預(yù)包被豬口蹄疫病毒O(OZK/93株+OS/99株)VP1表位多肽抗原的微孔板和酶標(biāo)記二抗及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測豬血清或血漿中口蹄疫病毒特異性抗體。實(shí)驗(yàn)時,在包被板中加入對照血清和稀釋的待檢血清,經(jīng)溫育后,若樣品中含有口蹄疫病毒的特異性抗體,則將與包被板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后;再加入酶標(biāo)二抗,與包被板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,在孔中加TMB底物液,與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有特異性抗體。

【試劑盒組成】

1.

口蹄疫病毒抗原預(yù)包被微孔板條

96T×1

2.

酶標(biāo)記物  紅蓋

11ml×1

3.

樣品稀釋液  藍(lán)蓋

25ml×1

4.

20X濃縮洗滌液  白蓋

25ml×1

5.

底物液A  (棕蓋

7ml×1

6.

底物液B  (黑蓋

7ml×1

7.

終止液  黃蓋

7ml×1

8.

陽性對照 紫蓋,已滅活

0.5ml×1

9.

陰性對照 綠蓋,已滅活

0.5ml×1

10.

蓋板膜

1

11.

說明書

1

    

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

【樣品制備】  取動物全血,按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品短期可于2~8℃保存,

              長期需置-20℃保存。

【樣品稀釋】  用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋(如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽性對

              照不用稀釋。
【洗滌液配制】濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫(25℃左右),并搖動使沉淀的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作

              20倍稀釋。

【試驗(yàn)操作方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量包被微孔板條,設(shè)空白、陰性及陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。

3.陰性、陽性對照孔分別加入陰性、陽性對照血清100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的血清樣本100μl;空白對

  照孔不加。

4.混勻,置37℃反應(yīng)30分鐘。

5.扣去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌,同步驟5。

8.每孔依次加顯色劑A、顯色劑B各50μl,混勻,37℃避光反應(yīng)10分鐘。

9.每孔加終止液50μl,混勻,用空白孔調(diào)零,于450nm(630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A)。

【結(jié)果判定】

定義:N=陰性對照孔平均A值;P=陽性對照孔平均A值;S=樣品孔A值;S/P=樣品孔A值/陽性對照孔平均A值。

1.正常情況下P/N≥2.1即試驗(yàn)成立;否則不成立。

2.S/P≥0.4時判為陽性,S/P<0.3時判為陰性,0.3≤S/P<0.4時判為可疑。

當(dāng)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性時表明豬的抗體水平不足,建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗。

【試驗(yàn)方法的局限性】

    該試驗(yàn)僅作為定性檢測豬口蹄疫病毒O型IgG抗體。不能用于區(qū)分口蹄疫野毒感染豬和用疫苗免疫豬。

【注意事項(xiàng)】

1.實(shí)驗(yàn)操作時需戴手套、穿工作衣,嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性,應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,未用完的微孔板需放入有干燥劑的密封袋中保存(包被板

  開封后請于2~8℃避光保存,使用期限為1個月)

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶,使用時需恢復(fù)至室溫以完全溶解。

5.洗滌時各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。

7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

8.不同批號試劑組分不得混用。

【儲  存】

原包裝應(yīng)儲存于28℃保鮮冷藏,切勿冷凍。

【有效期】

有效期12個月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號見外包裝。

 

原創(chuàng)作者:上海極威生物科技有限公司

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