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技術(shù)文章

小鼠抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

點擊次數(shù):17758   發(fā)布時間:2016/6/17 14:34:29

 小鼠抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍:15ng/L -480ng/L

使用目的:

本試劑盒用于測定小鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中抗雙鏈DNA 抗體(dsDNA)含量。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中小鼠抗雙鏈DNA 抗體(dsDNA)水平。用純化的

抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被的微孔中依次加入抗雙鏈DNA 抗體(dsDNA),再

HRP 標(biāo)記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-抗原復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB 顯色。

TMB HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣

品中的抗雙鏈DNA 抗體(dsDNA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),

通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠抗雙鏈DNA 抗體(dsDNA)濃度。

試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 7 終止液6ml×1

2 酶標(biāo)試劑6ml×1 8 標(biāo)準(zhǔn)品(960ng/L0.5ml×1

3 酶標(biāo)包被板12 孔×8 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1

4 樣品稀釋液6ml×1 10 說明書1

5 顯色劑A 6ml×1 11 封板膜2

6 顯色劑B 6ml×1/12 密封袋1

標(biāo)本要求

1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能

馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀

釋。

480ng/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

240ng/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品150μl 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

120ng/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品150μl 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

60ng/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品150μl 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

30ng/L 1 號標(biāo)準(zhǔn)品150μl 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、

待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl

然后再加待測樣品10μl(樣品*終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡

量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此

重復(fù)5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止

液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

操作程序總結(jié):

計算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的

OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計算出標(biāo)

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),

即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未

用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間

控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD

大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計

算時請*后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6 個月

原創(chuàng)作者:上海極威生物科技有限公司

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