聯(lián) 系 人：段煜
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點擊次數(shù)：16927 發(fā)布時間：2022/12/26 13:02:00
產(chǎn)品信息：T25細胞到貨處理
觀察：
1、收到細胞后，請及時核對培養(yǎng)瓶上標注的細胞名稱是否與訂購的細胞名稱一致以及培養(yǎng)瓶是否有破損或漏液等異常情況。
處理：
1、75%酒精棉球擦拭 T25 細胞培養(yǎng)瓶外部。
2、顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（40x,100x,200x 各一張）前三天照片為重要售后依據(jù)，不提供照片默認收到狀態(tài)良好。
3、不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞放入 37 度培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時后再做處理，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
4、收到細胞后，及時查看說明書是貼壁細胞還是懸浮細胞形態(tài)，并按常規(guī)貼壁或懸浮細胞的傳代方法操作。
貼壁：未超過 80%匯合度時，將瓶裝的wan全培養(yǎng)液收集至離心管中，留 5ml wan全培養(yǎng)基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng)；超過 80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。shou次傳代，建議 1:2 傳代（兩個 T25）。（傳代時建議一瓶用原瓶里面的wan全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的wan全培養(yǎng)基，進行對比培養(yǎng)。）
特殊細胞注意事項：個別細胞貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生細胞脫落，這是正�，F(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm 離心 5min，收集上清（后期對比培養(yǎng)使用），沉淀加入胰酶 1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化 1-2 分鐘后，加 5ml wan全培養(yǎng)基終止反應。再離心，棄上清，加 1-2ml wan全培養(yǎng)基重懸。然后按 1:2 比例進行分瓶傳代（兩個 T25），補充新的wan全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，zui后放入 37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
（注意：如收到密封培養(yǎng)瓶，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)時要將培養(yǎng)瓶蓋子擰松）
產(chǎn)品名稱：U87MG
產(chǎn)品貨號：0162
中文名稱：人惡性膠質(zhì)瘤細胞
基本形態(tài)：上皮樣
培養(yǎng)條件：DMEM+10%FBS
生長特性：貼壁生長
消化時間：1 分鐘左右
培養(yǎng)環(huán)境：37℃，5%CO2，95%AIR
備注凍存細胞到貨處理
1、收到細胞后，檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已wan全揮發(fā)等問題，請即時聯(lián)系。
2、將細胞取出轉移至液氮或－80 度冰箱保存，建議盡早復蘇。
3、復蘇第yi管如有活性狀態(tài)問題及時與我們聯(lián)系，會有技術人員與您溝通指導后再復蘇第二管。特別說明：未與我方聯(lián)系擅自復蘇第二管出現(xiàn)問題不予售后。
細胞復蘇
1、 從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2、將凍存管中的細胞移至含 5ml wan全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；
3、棄上清，沉淀用 5ml wan全培養(yǎng)基重懸，接種 T25 培養(yǎng)瓶，于 37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4、第二天，換用新鮮wan全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
細胞傳代
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次：
2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml wan全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；
3、棄上清，沉淀細胞用 1-2ml wan全培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代（兩個 T25），補充新的wan全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，zui后放入 37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
細胞凍存
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；
2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml wan全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；
3、 棄上清，沉淀細胞加入 1ml/支的富衡無血清凍存液（GV7001），混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液）
4、 將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉入液氮罐中，需在-80℃冰箱存放 24 小時以上。
本庫的細胞系（株）僅用于科研工作。
原創(chuàng)作者：上海極威生物科技有限公司
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王小姐
