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技術(shù)文章

5XFAD小鼠基因檢測(cè)報(bào)告

點(diǎn)擊次數(shù):16913   發(fā)布時(shí)間:2022/8/8 15:00:45

 5XFAD小鼠基因檢測(cè)報(bào)告

動(dòng)物品系: 5XFAD 小鼠                  操作日期:

 

1.主要試劑         

試劑名稱

生產(chǎn)廠家

備注

上游引物oIMR 3610

Invitrogen

下游引物oIMR 3611

Invitrogen

上游引物oIMR1644

Invitrogen

下游引物oIMR 1645

Invitrogen

陽(yáng)性內(nèi)標(biāo)oIMR7338

Invitrogen

陽(yáng)性內(nèi)標(biāo)oIMR7339

Invitrogen

TE緩沖液

Invitrogen

瓊脂糖

Invitrogen

Sybr Safe 染液

Invitrogen

TAE緩沖液

自制

EmeraldAmp PCR Master Mix

TAKARA

RNase-free水

GIBCO

注:實(shí)驗(yàn)中用到的試劑在備注項(xiàng)打“√”,沒(méi)有用到的試劑打“—”,與列表不一致的試劑在備注中說(shuō)明。

2.主要儀器: 

儀器名稱

生產(chǎn)廠家

儀器型號(hào)

儀器編號(hào)

備注

MINI離心機(jī)

FORCE

SBC140-2

SB0363

漩渦混合儀

Scientific Industries

G560E

SB0484

電子天平

AL104-IC

梅特勒托利多

SB0006

PCR儀

BIO-RAD

Thermal Cycler

SB0407

移液器

Thermo/ Eppendorf/Brand

P10/P100/

P200/P1000

SB0108/SB0230

SB0608/SB0089

注:實(shí)驗(yàn)中用到的儀器在備注項(xiàng)打“√”,沒(méi)有用到打“—”,與列表不一致的在備注中說(shuō)明。

 

3.PCR操作步驟     

 

試劑

體積(μl)

模板

1

oIMR3610

0.4

oIMR3611

0.4

oIMR1644

0.4

oIMR1645

0.4

oIMR7338

0.4

oIMR7339

0.4

Master mix (2×)

10

RNase-free水

6.6

終體積

20

 

 

4. PCR反應(yīng)條件

94 ℃ 3 min;

94 ℃ 30 sec, 54 ℃ 60 sec,72 ℃ 60 sec  35×;

72 ℃ 5 min;

 

5. 1%瓊脂糖凝膠電泳體系

    稱取 1.6 1.6g)瓊脂糖加入  100  100ml)TAE緩沖液中混勻,微波爐加熱兩次沸騰后加7μl染液,混勻,倒入板中凝固。凝固后每孔加入15μl樣本,每行*孔加入5μl Marker。進(jìn)行凝膠電泳。

6. 拍圖

   完成的凝膠電泳經(jīng)過(guò)凝膠成像系統(tǒng)拍圖得出結(jié)果

  

7. 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

引物名稱

序列5’→3’)

PCR產(chǎn)物大小

上游引物oIMR 3610

AGGACTGACCACTCGACCAG

377bp

下游引物oIMR 3611

CGGGGGTCTAGTTCTGCAT

上游引物oIMR1644

AATAGAGAACGGCAGGAGCA

608bp

下游引物oIMR 1645

GCCATGAGGGCACTAATCAT

陽(yáng)性內(nèi)標(biāo)oIMR7338

CTAGGCCACAGAATTGAAAGATCT

324bp

陽(yáng)性內(nèi)標(biāo)oIMR7339

GTAGGTGGAAATTCTAGCATCATCC

 

 

8. 結(jié)果判定

根據(jù)成像結(jié)果及判定標(biāo)準(zhǔn),陽(yáng)性動(dòng)物編號(hào)如下:共計(jì)16只

8566、 8582、8584、8573、8586、8588、8577、8590、

8591、 8592、8543、8593、8546、8547、8595、8596

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